Современные проблемы экологии - причина бесплодия.
Антитела являются одним из наиболее важных реагентов при определении антигенов методом иммуноанализа. Антитела могут быть
1) поли- или моноклональными;
2) различного типа (IgG или IgM) и подтипа (IgGl, IgG2a);
3) моно-, би- или поливалентными;
4) моно- или биспецифическими;
5) антиаллатипическими или антиидиотипическими;
6) нативными или полученными химическим или генно-инженерным путем;
7) мечеными или связанными тем или иным способом с твердой фазой.
Провести ремонт крот профессионально. - причина бесплодия.
Поликлональная антисыворотка может содержать до 10 000 различных типов молекул IgG. Напротив, все молекулы монокло-нальных антител должны быть идентичными. Моноклональные антитела предпочтительнее в методах конкурентного иммуноанализа, поскольку в этом случае можно утверждать, что меченый или связанный с твердой фазой антиген и определяемое вещество конкурируют за один и тот же центр связывания. Моноклональные антитела очень хорошо работают в "сандвич"-анализе, поскольку, как правило, хорошо известна специфичность их эпитопов. Такие антитела легко получать в больших количествах и с высокой степенью чистоты. Большинство нативных антител бивалентны, и все они моноспецифичны. Недавно с помощью гибридных гибридом и методов генной инженерии получены новые типы антител. Антитела могут быть мечеными или связанными с твердой фазой с помощью пассивной адсорбции или за счет ковалентных связей. Исследования мочи ежедневно - анализ мочи для определения беременности.
На ранних этапах развития иммуноанализа предпочтение отдавалось жидкофазным методикам, в которых связавшиеся антитела осаждали (например, с помощью вторичных антител) или несвязавшийся антиген удаляли адсорбцией с помощью активированного угля, покрытого декстраном (твердофазный реагент). В настоящее время наиболее распространены твердофазные методики, поскольку они позволяют существенно упростить проведение анализа и уменьшить фоновый сигнал. Предлагались следующие типы носителей:
1) трубки (например, стеклянные, полистирольные, полипропиленовые) ;
2) гранулы (например, активированного полистирола);
3) мелкие частицы (например, полиакриламида, целлюлозы, сефарозы);
4) микропланшеты или полоски (например, полистирольные);
5) дипстики, карточки, стержни (например, полистирольные);
6) электроды (например, платиновые, углеродные);
7) пленки или волокна (например, стеклянные, кварцевые). Если система включает электрод, то ее можно назвать био- или иммуносенсором.
В качестве меток для контроля реакции антиген - антитело рекомендовались:
1) частицы (например, эритроциты, латексы);
2) золи металлов и красителей (например, золото, Palanil® Luminous Red G);
3) радионуклиды (например, иод-125, тритий);
4) ферменты, субстраты, кофакторы; .
5) потенциальные люминофоры (например, производные изо-люминола, эфиры акридина);
6) электрохимически активные соединения (например, диме-тиламинометил ферроцен).
Люминесценция - это процесс излучения света веществом, находящимся в электронно-возбужденном состоянии. В зависимости от источника энергии, необходимой для перевода электронов в возбужденное состояние, различают несколько типов люминесценции, а именно:
1) радиолюминесценция,
2) фотолюминесценция - флуоресценция и фосфоресценция,
3) хемилюминесценция и биолюминесценция,
4) термохемилюминесценция,
5) электрохемилюминесценция,
6) сонохемилюминесценция.
Возможны и другие сочетания (фототермолюминесценция, электротермолюминесценция и т. д.). Иногда, например при флуоресценции и электролюминесценции, одна и та же молекула может последовательно испускать несколько фотонов.
Одни метки предпочтительнее при проведении анализов вне лаборатории, другие дают лучшие результаты в высокочувствительных анализах, чувствительность которых зависит от удельной активности реагента и отношения сигнал /шум. Тип метки часто используется наряду с основным принципом при описании и классификации методов иммуноанализа (радиоиммуноанализ, иммуно-радиометрический анализ, иммуноферментный анализ, ферментативный иммунометрический анализ и т. д.). Кроме того, в описании может быть указано и использование твердой фазы, например твердофазного иммуноферментного анализа ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Меченый реагент иногда называют биозондом.
Для определения меченых соединений и комплексов можно применять различные методы:
1) оптические:
фотометрические, включая нефелометрические (для мечных соединений и продуктов);
фотоэмиссионные, в том числе измерение
- флуоресценции (поляризационной и с временным разрешением) ;
- фосфоресценции;
- хемилюминесценции (со свечением более 180 с и импульсной со свечением менее 20 с);
измерение рассеяния и отражения фотонов частицами в растворе и реагентами на поверхностях;
2) электрические: потенциометрические; амперометрнческие;
3) термические: калориметрические;
4) акустические: сонометрические.
На завершающем этапе иммуноанализа величина сигнала от метки может быть выражена в виде ее общего количества или в виде концентрации. Кроме того, непосредственно определяемой величиной может быть скорость реакции. Способ регистрации также можно использовать для классификации методов иммуноанализа (оптический иммуноанализ, амперометрический иммуноанализ и т. д.).
Кроме того, методы иммуноанализа можно классифицировать по способу осуществления:
1) жидкофазные или твердофазные,
2) ручные, полуавтоматические или автоматические,
3) с разделением (гетерогенные) или без разделения (гомогенные),
4) с экстракцией или без экстракции.
Жидкофазные или твердофазные методы могут быть ручными, полуавтоматическими с частичным участием оператора или полностью автоматическими (после завершения операций подготовки пробы). Кроме того, они могут включать или не включать стадию разделения свободного и связанного с антителами определяемого вещества. Наконец, исследуемое вещество можно определять или после выделения, или непосредственно в исходном образце. Долю не связанных с белками (т.е. кажущихся свободными) гаптенов можно оценить непосредственно.
Дальнейшее развитие методик иммуноанализа необходимо для решения следующих задач:
1) расширения круга определяемых соединений;
2) повышения чувствительности (например, при определении вирусных и бактериальных антигенов и опухолевых маркеров);
3) расширения рабочего диапазона концентраций (что позволит обходиться без разбавления проб);
4) сокращения времени проведения анализа;
5) развития внелабораторных й домашних диагностикумов;
6) разработки методик одновременного определения нескольких веществ или объектов, например для оценки гормональных и бактериальных профилей;
7) производства реагентов и наборов с большим сроком хранения в неблагоприятных условиях;
8) государственной и межгосударственной стандартизации.